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牛血清蛋白
牛血清中的球蛋白之一
牛血清白蛋白（BSA），又稱第五組分，是牛血清中的一種球蛋白，包含583個(gè)氨基酸殘基，分子量為66.430 kDa，等電點(diǎn)為4.7。牛血清白蛋白在生化實(shí)驗(yàn)中有廣泛的應(yīng)用，例如在western blot中作為Blocking agent。
簡介
【詞條中文名稱】牛血清白蛋白
【詞條拼音名稱】Níuxuèqīng báidànbái
【詞條英文別名】Bovine serum albumin
【詞條英文同義詞】nhsa;BSA-C;AC-BSA;ALBUMIN, PIG;albumenpowder;SERUM ALBUMIN;ACETYLATED BSA;BSA ACETYLATED;Bovine albumin;BSA, METHYLATED
【詞條分類性質(zhì)】名詞詞組，偏正詞組
【詞條適用范圍】醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，藥學(xué)領(lǐng)域
【CAS數(shù)字登錄號(hào)】9048-46-8
BSA結(jié)構(gòu)
CBNumber: | CB5107573 |
分子式： | N/A |
英文別名： | Bovine serum albumin |
化學(xué)性質(zhì)
牛血清白蛋白
form : lyophilized powder
Merck : 13,8542
用途介紹
BSA結(jié)構(gòu)
BSA作用
BSA一般做為穩(wěn)定劑被用于限制酶或者修飾酶的保存溶液和反應(yīng)液中，因?yàn)橛行┟冈诘蜐舛认虏环€(wěn)定或活性低。加入BSA后，它可能起到“保護(hù)”或“載體”作用，不少酶類添加 BSA后能使其活性大幅度提高。不需要加BSA的酶加入BSA一般不會(huì)受到什么影響。對(duì)多數(shù)底物DNA而言，BSA可以使酶切更完全，并可實(shí)現(xiàn)重復(fù)切割。在37℃，酶切反應(yīng)超過1h時(shí)，BSA可以使酶更加穩(wěn)定，因?yàn)樵诓缓珺SA的反應(yīng)緩沖液中，許多限制性內(nèi)切酶在37℃下只能存活10"20min甚至更短的時(shí)間。而BSA可以結(jié)合緩沖液或底物DNA中抑制限制性內(nèi)切酶活性的金屬離子和其它化學(xué)物質(zhì)。
牛血清蛋白
2.BSA能減輕有些酶的變性，能減輕有些不利環(huán)境因素如加熱，表面張力及化學(xué)因素引起的變性，至于作用機(jī)理還不明確，可能是因?yàn)樗Y(jié)構(gòu)中有17個(gè)二硫鍵和一個(gè)巰基，巰基的化學(xué)反應(yīng)很活潑，二硫鍵有抗氧化還原的作用，因此可與多種陽離子、陰離子和小分子結(jié)合；
3.BSA能防止酶吸附到管壁而損失。
介紹
牛血清白蛋白分子式
牛血清白蛋白是血液中的主要成分（38g/100ml），分子量68kD，等電點(diǎn)4.8，含氮量16%，含糖量0.08%，僅含已糖和已糖胺，含脂量只有0.2%。白蛋白由581個(gè)氨基酸殘基組成，其中35個(gè)半胱氨酸組成17個(gè)二硫鍵，在肽鏈的第34位有一自由巰基。白蛋白可與多種陽離子、陰離子和其他小分子物質(zhì)結(jié)合。
牛血清蛋白溶液可以作為測量蛋白質(zhì)含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線用。
一般買回來的牛血清蛋白是細(xì)小片狀的乳白色粉末。牛的血清蛋白也以鐵為基本原料。
用途
1、特純級(jí)牛血清蛋白
性狀：淡黃色干燥粉末
用途：用作酶標(biāo)、金標(biāo)等診斷試劑的封閉劑、保護(hù)劑，尤其適用于容易受脂肪酸影響的產(chǎn)品和試驗(yàn)。
性狀：淡黃色干燥粉末
用途：用于酶標(biāo)、金標(biāo)等診斷試劑的封閉劑、保護(hù)劑，尤其適合血液脂類的診斷試驗(yàn)、脂類診斷試劑及對(duì)純度要求高的產(chǎn)品。
性狀：淡黃色干燥粉末
4、細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)牛血清蛋白
性狀：淡黃色干燥粉末白蛋白
測定
標(biāo)準(zhǔn)曲線
一般用分光光度法測物質(zhì)的含量，先要制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線查出所測物質(zhì)的含量。因此，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線是生物檢測分析的一項(xiàng)基本技術(shù)。
測定方法
1. 凱氏定氮法
2. 雙縮脲法
3. Folin-酚試劑法
4. 紫外吸收法
5. 考馬斯亮藍(lán)法
標(biāo)準(zhǔn)曲線制作
試劑
1. 考馬斯亮藍(lán)試劑：
考馬斯亮藍(lán)G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇，加入100ml 85% H3PO4，用蒸餾水稀釋至1000ml,濾紙過濾。最終試劑中含0.01%（W/V）考馬斯亮藍(lán)G—250,4.7%（W/V）乙醇，8.5%（W/V）H3PO4。
2. 標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液：
器材
1. 722S型分光光度計(jì)使用及原理。
2. 移液管使用。
制作步驟
試管編號(hào) 0 1 2 3 4 5 6
100ug/ml標(biāo)準(zhǔn)蛋白（ml） 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
0.15mol/L NaCl （ml） 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4
考馬斯亮藍(lán)試劑（ml） 5 5 5 5 5 5 5
搖勻，1h內(nèi)以1號(hào)管為空白對(duì)照，在595nm處比色
3、以A595nm為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)蛋白含量為橫坐標(biāo)（六個(gè)點(diǎn)為10ug、20 ug、30 ug、40 ug、50 ug、60 ug），在坐標(biāo)軸上繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
（1）、利用標(biāo)準(zhǔn)曲線查出回歸方程。
（2）、用公式計(jì)算回歸方程。
（3）、或用origin作圖，測出回歸線性方程。即A595nm=a×X( )+6
一般相關(guān)系數(shù)應(yīng)過0.999以上，至少2個(gè)9以上。
(4）、繪圖時(shí)近兩使點(diǎn)在一條直線上，在直線上的點(diǎn)應(yīng)該在直線兩側(cè)。
含量的測定
樣品即所測蛋白質(zhì)含量樣品（含量應(yīng)處理在所測范圍內(nèi)），依照操作步驟1操作，測出樣品的A595nm，然后利用標(biāo)準(zhǔn)曲線或回歸方程求出樣品蛋白質(zhì)含量。
一般被測樣品的A595nm值在0.1—0.05之間，所以上述樣品如果A595nm值太大，可以稀釋后再測A595nm值，然后再計(jì)算。
注意事項(xiàng)
1. 玻璃儀器要洗滌干凈。
2. 取量要準(zhǔn)確。
3. 玻璃儀器要干燥，避免溫度變化。
4. 對(duì)照：用被測物質(zhì)以外的物質(zhì)作空白對(duì)照。
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